作者：南京农业年夜学病理学博士 彭麟
金南农研讨院 朱忠超
一、固体过氧化氢的细菌杀灭实验
1、菌悬液的制备
取各实验菌种的斜面第3代培育物，用无菌心理盐水洗下菌苔，移至另一无菌试管，恰当稀释使菌含量为 1 × 107 ～ 5 × 107 CFU·mL-1，制成菌悬液备用。中和剂选择实验: 中和剂组方: 10 g·L-1硫代硫酸钠( A 组) ，10 g·L-1硫代硫酸钠 10 g·L -1吐温-80 ( B 组) ，10 g·L-1 硫代硫酸钠 10 g·L-1 吐温-80 10 g·L-1卵磷脂( C 组) ，20 g·L-1 硫代硫酸钠( D 组)，均以 PBS 缓冲液配制。以年夜肠杆菌为实验菌株，以 10.8 g·L-1过氧化氢消毒溶液为试药，设计 6 组：
1) 消毒剂 菌悬液;
2) 消毒剂 菌悬液) 中和剂;
3) 中和剂 菌悬液;
4) 消毒剂 中和剂) 菌悬液;
5) 菌悬液;
6) 培育基。
1.1实验成果鉴定尺度：第 6 组无菌发展，第 4 组无菌发展或仅有少量菌落发展; 第 1 组有菌落发展，较 第 4 组为多，但较第 2、3、5 组为少; 第 2、3、5 组组间误差率不跨越 15% 。如实验成果合适以上尺度则表白 所选中和剂及其浓度合适。实验反复 3 次。
1.2定量杀菌实验：设计 10.8 g·L-1、5.4 g·L-1和2.7 g·L-1 3 种质量浓度的 过氧化氢消毒药液。固体过氧化氢消毒液在应用时用无菌水配制。以无菌心理盐水作为阳性对比。取0.5 mL 菌悬液置于无菌试管内，参加 4.5 mL 实验浓度消毒液，当即混匀。分辨感化至预设时光( 30 min、60 min、90 min 和 120 min) 后，各取0.5 mL 混杂液参加到含4.5mL 中和剂的试管内，感化 30 min 后取 0.5mL 该液做活菌计数，盘算杀菌率。实验反复 3 次。
成果处置:按如下公式盘算各实验组的均匀杀菌率( P)
P = ∑( Noi － Nti )/ ∑Noi × 100%
式中：Noi为第 i 次实验消毒前或对比组活菌数; Nti为第 i 次实验消毒 t 时后或实验组活菌数。消毒后果评价尺度: 对细菌和真菌的杀灭率不低于99.9% ，可判为消毒及格。
数据剖析：采取 SPSS 17.0统计软件，对杀菌成果进行方差剖析和 Duncan's 多重比拟。
2、成果与剖析
2.1固体过氧化氢杀菌后果察看
2.1.1中和剂选择：由表 1 可知，中和剂A组第 1 组无菌落发展，且第 2、3、5组间的菌落数误差率为 25.52% ，依据请求，第2、3、5组间的菌落数误差率须小于15% ，所以 A组不合适请求; B组第1组有少量菌落发展，第 4 组无菌落发展，但第 2、3、5 组间的菌落数误差率到达 22.75% ，不合适请求; C 组第1组和第4组菌落数合适请求，但第2、3、5组间的菌落数误差率为18.75% ,也不合适请求。D组第1、4 组菌落数合适请求，且第 2、3、5 组间的菌落数误差率( 3.78% ) 也合适规范请求。上述成果表白，含20 g·L-1硫代硫酸钠的 PBS 缓冲液作为中和剂，可有用中和10.8 g·L-1 过氧化氢消毒液的残留感化。
注: 1) A 组: 10 g·L-1硫代硫酸钠； B 组: 10 g·L-1硫代硫酸钠 10 g·L-1吐温-80；C 组: 10 g·L-1硫代硫酸钠 10 g·L-1吐温-80 10 g·L-1卵磷脂; D 组: 20 g·L-1硫代硫酸钠
2.1.2实验分组: 1.消毒剂 菌悬液; 2.(消毒剂 菌悬液) 中和剂; 3.中和剂 菌悬液; 4.(消毒剂 中和剂) 菌悬液; 5.菌悬液; 6.培育基
固体过氧化氢的杀菌后果：由表2可知，10.8g·L-1过氧化氢消毒液感化30 min，杀灭年夜肠杆菌后果可到达 99.99% ，消毒及格; 3 种浓度分辨感化 60 min，杀菌后果均可到达 99.9% 以上，但10.8 g·L-1与另两种浓度比拟，差别明显( P＜ 0. 05) 5.4g·L-1浓度组与2.7 g·L-1组比拟，差别不明显( P＞0.05) 。可依据 需求选择分歧的感化浓度和感化时光。10.8g·L-1 过氧化氢 消毒液与金黄色葡萄球菌感化 30 min 的杀菌率到达了99.92% ,5.4g·L-1浓度组比拟差别不明显( P＞0.05) 10.8g·L-1及5.4 g·L-1 浓度组消毒液感化 90 min 时的后果与感化 60min 和 30 min 比拟均存在明显性差别( P＜0.05) 。2.7g·L-1消毒液分歧感化时光杀菌率差别明显( P＜0.05)。是以可依据分歧需求选择分歧感化浓度和时光。 3种浓度分辨与副溶血弧菌感化 120 min，杀菌率均可到达 100% ，差别不明显( P＞0.05) 。
注: 同菌种同列分歧小写字母表现差别明显( P＜0.05) 同业分歧年夜写字母表现差别明显( P＜0.05) 。
经由过程固体过氧化氢对年夜肠杆菌、金黄色葡萄球菌和副溶血弧菌的杀菌实验，进步前辈一步验证固体过氧化氢杀菌的有用性，同时为南美白对虾养殖致病菌的防控供给更坚实的数据，联合南美白对虾养殖一线剖析，才干更好的对致病菌进行防控。
二、南美白对虾养殖弧菌沾染的起源
1、水体自己存在
一般来说， 弧菌是自然水域天然存在的，属于厌氧菌。假如水体溶氧不足，“氧债”增添，就会给弧菌繁殖供给了有利前提。
2、苗种自带
假如在亲虾时代，沾染上了弧菌，弧菌可经由过程垂直方法沾染至无节幼体中。苗体中自带的弧菌，具有损坏性年夜、沾染性强、迫害深远的特色。
三、弧菌的防控周期
1、前期（放苗后--30天）。此阶段苗体较小，以粉料及小粒径饲料为主，而对虾摄食量有限，发生的残饵多，导致水体中有机物会快速增添，弧菌会快速滋生，尤其是体内弧菌的滋生，损坏力更年夜，迫害更严重。此阶段弧菌防控应为3-5天一次。
虾苗期弧菌较多，虾苗可以平安消鸩杀菌吗？起首明白告知大师， 苗期是可以消毒的，可是要选准确、平安、无刺激的消毒产物！
若何将产物做到平安无刺激、无残留？金南农研讨院历经10年研发的专利性产物--固体过氧化氢粉，很好的解决了这些难点和痛点。
2、中期（31--60天）。此阶段对虾个头变年夜，饲料投喂增添，饲料粒径在1.0摆布，对虾处于快速发展期，对水体溶氧需求增年夜。假如溶氧不足，弧菌就会大批滋生。此阶段弧菌防控应为5-7天一次。
3、后期（61--90天）。此阶段饲料投喂量年夜，易呈现缺氧现象，导致弧菌爆发。此阶段弧菌防控为7-10天一次，推举应用量为：过氧化氢粉250克/棚 过氧化氢颗粒500克/棚。
四、弧菌为什么爆发快
经由过程多年的跟踪剖析，对于弧菌快速爆发原因，总结如下：
1、苗种自带的弧菌，迫害很年夜，导致苗种逝世亡率更高；
2、底溶氧不足，弧菌滋生加速；
3、水体有机物过多，水体耗氧量剧增，导致弧菌快速滋生；
4、消毒类产物的分歧理应用，导致水体微生态掉衡，弧菌增添；
5、极端天气的呈现，会导致弧菌防控难度增添。
海产养殖就是养水, 要进行南美白对虾的高效养殖和产出 , 其硬性前提是有利于南美白对虾健康发展的水质, 水体中的细菌微生物作为南美白对虾养殖中的动态身分，然而在寻求高产为中间的养殖模式中，因为水体情况的恶化速度加速，致病菌快速大批的滋生，导致南美白对虾很轻易呈现细菌沾染，激发各类肝胰腺和肠道疾病，严重制约和影响了南美白对虾养殖的稳产和高产 。
小棚对虾养殖、工场化对虾养殖以及高位池对虾养殖作为分歧高密度养殖模式，对养殖情况和相干应用产物都有较高请求，尤其是在选用消毒类产物的时辰，很是谨严。而固体过氧化氢作为一款绿色环保第六代消毒剂，真正做到“无刺激、无残留、无余氯”，可全天候应用，不受前提限制，停止了惯例消毒剂各类应用限制，像阴天、下雨、蜕壳期、气温变更年夜等制约身分，固体过氧化氢做到了百用无禁忌，防控弧菌、气单胞菌及病毒更超前。
